青青草国拍2019-青青草国拍-青青草国产在线观看-青青草国产在线-青青草国产一区二区三区-青青草国产三级精品三级

歡迎進入南京賽飛生物科技有限公司網站!
18066098963
技術文章

TECHNICAL ARTICLES

當前位置:首頁  -  技術文章  -  關于細菌超聲破碎的一些經驗總結

關于細菌超聲破碎的一些經驗總結

更新時間:2022-09-05點擊次數:1378

細菌工程菌胞內表達主要分為兩種形式,一種是在強啟動子條件下的高效表達,由于蛋白的過度表達,使蛋白不能及時有效折疊而發生無規則卷曲,以固體顆粒的形式堆積于胞間質中,這就是所說的包涵體,另外一種是間質內的可溶性表達,即可以發生正常折疊,具有生物活性。一般情況下,細菌只要被正常破壁就可以通過離心的形式將包涵體和可溶性表達的蛋白分離開。

超聲破碎的條件一般是300w10s/10s20分鐘,具體條件可根據自身情況而定。

超聲前菌體的準備:菌液離心后,先用PBS將菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液體積的1/5-1/10加入裂解液重懸菌體,裂解液的成分:50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA100mM NaCl,加溶菌酶至100ug/ml0.1%Triton X-100。切記冰浴超聲!

如何判斷是否超聲*:根據網友的經驗,一般有以下幾個方面:

1,外觀判斷:超聲前菌懸液是渾濁的,超聲*后變的透明、清澈。

2,液體的粘滯性:超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

3,高速離心:有用高速離心檢測超聲破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉速高一點)。 沉淀是未破碎或破碎不*的菌體。

4,染色:破碎后的菌液涂片,革蘭氏結晶紫溶液染色0.5分鐘,鏡檢。

超聲后加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染。

一些需要注意的問題:

1,蛋白以包涵體形式表達,追求的是高破碎率,要求細胞碎片很小,而另一種蛋白是可溶形式表達,所以細胞碎片不能很小,兩種情況要求不同但目的相同,都是便于后期的固液分離。

2,如果超聲時出現黑色沉淀,說明超聲功率太強。

3,超聲時間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響。

4,盡量防止泡沫的產生。


TEL:025-85550178

掃碼加微信

主站蜘蛛池模板: 91国语精品自产拍在线观看一 | 欧美一级片在线视频 | 久久综合网久久综合 | 毛片区| 99色亚洲 | 亚洲欧美国产另类 | 亚洲国产精品一区二区三区久久 | 国产精品1024永久免费视频 | 日韩免费高清完整版 | 国产喂奶300部 | 精品免费 | 免费网站看v片在线成人国产系列 | 欧美国产视频 | 日韩一区视频在线 | 垫底辣妹免费观看完整版 | 亚州笫一色惰网站 | 国产一级特黄aa大片免费 | 国产成人理在线观看视频 | 日韩资源在线 | 欧美视频一 | 国产精品国产三级在线专区 | 国产实拍会所女技师在线 | 国产a不卡片精品免费观看 国产aaa伦理片 | 日本一片免费观看高清完整 | 香蕉久久夜色精品国产小优 | 99在线视频精品费观看视 | ai换脸杨颖被啪在线观看 | 亚洲黄色天堂 | 精品日韩视频 | 亚洲精品久久7777777 | 91国产高清| 日韩免费在线看 | 国内精品久久久久久中文字幕 | 免费观看美女被cao视频 | 成人在线观看视频免费 | 国内在线播放 | 精品国产福利在线观看一区 | 亚洲精品国产成人7777 | 免费网址在线观看入口推荐 | 羞羞私人影院可以直接免费观影吗 | jk制服蕾丝超短裙流白浆 |